Святитель Митрофан родился в 1623 году в семье благочестивых людей. Половину жизни он провёл в миру: был женат, имел сына и служил приходским священником, ревностно заботясь о пастве. После кончины супруги он принял монашеский постриг и вступил на иноческий путь, со временем став настоятелем монастырей.
В 1682 году святитель был поставлен первым епископом новоучреждённой Воронежской кафедры. Он застал свою епархию в бедности и нестроении и ревностно принялся за её устроение: строил храмы, заботился о просвещении и нравственности духовенства и народа, обличал раскол и нерадение, являя пример строгой и святой жизни.
Святитель был современником и сподвижником царя Петра в добрых начинаниях: он поддерживал строительство флота в Воронеже, благословлял труды на пользу Отечества и жертвовал церковные средства на государственные нужды. Вместе с тем он не боялся обличать неправду: известно предание, как святитель отказался войти во дворец, где стояли языческие изваяния, готовый принять смерть, но не поступиться благочестием.
Святитель отличался милосердием к бедным, заключённым и больным, тратя на них почти все средства. Перед кончиной он принял схиму с именем Макарий и преставился в 1703 году. Его честные мощи были обретены нетленными в 1832 году и ныне почивают в Воронеже, прославленные многими чудесами.
Святитель Митрофан Воронежский почитается как мудрый устроитель епархии, ревнитель благочестия и патриот, соединявший верность Богу со служением Отечеству. Его житие учит нестяжанию, твёрдости в вере и заботе о ближних.